總超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)試劑盒(NBT 核黃素微板法)的產(chǎn)品使用注意事項(xiàng)

總超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)試劑盒(NBT 核黃素微板法)的產(chǎn)品簡(jiǎn)介

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)是含金屬輔基的酶，能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成過(guò)氧化氫(H2O2)和氧氣(O2)，是生物體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，由于超氧自由基是不穩(wěn)定的的自由基，壽命極短，SOD 活性一般用間接方法測(cè)定，并利用各種呈色反應(yīng)來(lái)測(cè)定 SOD 活力，其中顯色劑有 NBT(唑藍(lán)四氮)、WST-1、WST-8 等?？偝趸锲缁?SOD)檢測(cè)試劑盒(NBT 核黃素微板法)(Total Superoxide Dismutase Assay Kit with NBT)是一種基于 NBT 的光還原反應(yīng)，所以又稱(chēng)作 NBT 光還原法，檢測(cè)原理是在有氧化物質(zhì)存在下核黃素被光還原，在有氧條件下，被還原的核黃素極易再氧化產(chǎn)生超氧陰離子自由基(O2.-)，O2.-可將氮藍(lán)四唑還原為藍(lán)色的甲腙，后者在 560nm處有強(qiáng)吸收，而 SOD 可清除超氧陰離子(O2.-)，從而抑制了甲腙的形成。于是光還原反應(yīng)后，反應(yīng)液藍(lán)色愈深，說(shuō)明 SOD 活性愈低，反之酶活性愈高，據(jù)此通過(guò)酶標(biāo)儀比色分析就可以計(jì)算出樣品中總超氧化物岐化酶活性水平。本方法是利用 SOD 抑制 NBT 在光照下的還原作用來(lái)確定酶活性大小，可用于檢測(cè)植物、組織、細(xì)胞、血清或其它樣品中 SOD 活性。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、生理鹽水或 PBS

2、電子天平、剪刀、低溫冰箱或制冰機(jī)、冰袋、勻漿器或研缽、離心機(jī)、離心管、小試管、 光照培養(yǎng)箱光源或 40W 熒光燈或日光燈、測(cè)光儀(照度計(jì))、酶標(biāo)儀、96 孔板

注意事項(xiàng)：

1、 上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。待測(cè)樣品-70℃可保存 1 個(gè)月，需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致 SOD 部分失活。

2、 植物中的多酚類(lèi)物質(zhì)會(huì)引起酶蛋白不可逆沉淀，使酶失去活性，因此在提取 SOD 酶時(shí)，必須添加多酚類(lèi)物質(zhì)的吸附劑，將多酚物質(zhì)除去，避免酶蛋白變性失活。SOD 提取試

劑含有 PVP 等成分，可有效去除多酚類(lèi)物質(zhì)。SOD 提取試劑不夠用可以用磷酸鈉緩沖液(0.05M,pH7.8)替代。

3、 細(xì)胞或組織等樣品制備時(shí)，不能采用含有 Triton X-100 等去垢劑的溶液，否則會(huì)干擾本試劑盒的檢測(cè)。

4、 抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾，例如 0.1mM ascorbic acid，5mM GSH 都

會(huì)使測(cè)定出來(lái)的吸光度顯著升高。

5、 對(duì)于植物樣品，研磨處理應(yīng)迅速，以免 SOD 酶活下降，盡量在冰浴條件下處理。

6、 如果用分光光度計(jì)，比色杯光徑應(yīng)為 1cm，加入的上清及試劑量應(yīng)根據(jù)比色杯的最小

要求體積而定。

7、 所用離心管或 96 孔板應(yīng)潔凈透明，透光性好。

8、 一般要求各孔受光情況一致，所有反應(yīng)管應(yīng)排列在與日光燈燈管平行的直線(xiàn)上。

9、 反應(yīng)溫度控制在 25℃，視酶活性高低適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)時(shí)間；溫度較高時(shí)，光照時(shí)間應(yīng)縮

短；溫度較低時(shí)，光照時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)。

10、 如果無(wú) 4000Lx 日光，可 200W 在 10~12cm 處，照射 20min；超凈工作臺(tái) 5cm 處光強(qiáng)約 800~1000Lx，,照射 30~40min；強(qiáng)太陽(yáng)光下一般光強(qiáng)可達(dá) 30000Lx，照射 5~15min，一般不建議直接用太陽(yáng)光。

11、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

總超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)試劑盒(NBT 核黃素微板法)的產(chǎn)品簡(jiǎn)介